Первое время полк состоял из трех стрелковых батальонов трехротного состава и двух специальных рот. Штаб полка располагался в здании Коммунистического университета (в настоящее время – главный корпус Ростовского государственного строительного университета по улице Социалистической, 162). В 1-й батальон принимали рабочих и инженеров заводов «Ростсельмаш» и «Красный Аксай» (разместился в здании управления мясокомбината, затем – в здании базы «Химбыт»). Во 2-й – обувной, мебельной и табачной фабрик, учащихся пожарного техникума (в школе № 60 на Новом поселении, затем – в здании филармонии). В 3-й – паровозоремонтного завода, управления Северо-Кавказской железной дороги, речного порта (в здании средней школы № 43, в настоящее время – профессионально-технического училища № 8, угол проспекта Буденовского и улицы Текучева, затем – в школе № 49) [39] . Таким образом, в основу структуры полка был положен территориально-производственный принцип. Медицинским персоналом обеспечивал Ростовский медицинский институт. Всего в состав полка вошли представители 150 предприятий и учреждений города.
В полк зачислялись на добровольной основе граждане, не подлежавшие призыву в РККА по каким-то причинам. Немало бойцов и командиров являлись участниками Гражданской войны – Г. К. Репин, Д. И. Казьминин, Ф. Д. Елизаров, П. Н. Юфимцев и другие. Некоторые приходили сразу семьями, с женами и детьми. Общая численность ополченцев неизвестна, так как часть документов полка была утрачена в июле 1942 г. По воспоминаниям очевидцев, она достигала 3 тысяч человек [40] .
Вплоть до начала октября ополченцы обучались военному делу без отрыва от производства, в свободное от работы время, а 10 октября полк был переведен на казарменное положение. К этому времени его численность составила всего 352 человека, многие ополченцы были призваны в ряды РККА, отозваны на предприятия, выпускавшие оборонную продукцию, эвакуировались с ними в тыл или оказались отчислены как непригодные к воинской службе. В связи с этим полк перешел на двухротный состав батальонов.
15 июля 1941 г. Ростовский обком ВКП(б) принял решение о создании добровольческой Донской казачьей дивизии. Центром формирования стал Сальск, а обеспечение конским составом, продуктами питания и фуражом изначально планировалось осуществлять за счет колхозного фонда области [41] . Дивизия формировалась на добровольческой основе из жителей области, не подлежавших призыву вследствие возраста, состояния здоровья или по «брони». Первым командиром дивизии стал полковник П. В. Стрепухов, с осени – генерал-майор Я. С. Шарабурко.
Ровно через три месяца, 15 октября 1941 г. областной и городской комитеты ВКП(б) приняли решение о создании еще одного добровольческого полка. Он получил название Коммунистического, так как создавался из коммунистов и комсомольцев города. Его командиром стал кадровый офицер, майор, коммунист Николай Федорович Скачков, начальником штаба – участник Гражданской войны, инструктор обкома партии Иван Дмитриевич Алексеев. Приказом № 0010 по 56-й Отдельной армии от 31 октября 1941 г. в ее состав были включены Ростовская дивизия народного ополчения и коммунистический полк [42] . Возможности дивизии учитывались как совместно действовавшего с 56-й армией соединения (см. приложение 3). Но участия в боевых действиях в ее составе она так и не принимала.
Ростовский стрелковый полк народного ополчения и коммунистический полк занимались боевой и политической подготовкой, несли гарнизонную и караульную службу. Поэтому 10 ноября бюро обкома ВКП(б) и командование 56-й Отдельной армии сочли целесообразным их объединить в один во главе с М. А. Варфоломеевым, Н. Ф. Скачков стал его заместителем [43] . Обеспечением полка оружием и боеприпасами занимались органы снабжения СКВО и 56-й Отдельной армии. Вооружение полка составили винтовки Мосина, СВТ, ручные пулеметы, гранаты и бутылки с зажигательной смесью. Обмундирования не хватало, и многие бойцы полка народного ополчения носили выданные им черные шинели учащихся школ профессионально-технического обучения [44] . К 18 ноября три батальона Ростовского полка народного ополчения вновь перешли на трехротную структуру. В 1-м батальоне насчитывалось 247 человек, во 2-м – 251 человек, в 3-м – 270 человек. Начал формироваться 4-й батальон. Общая численность ополченцев к этому времени составила 1118 человек.