Только выпав из шляпки споры представляют собой влажные набухшие клетки с высоким процентом всхожести. С течением времени они высыхают, разрушаясь и сжимаясь ближе к центру, и им уже не так просто прорасти. Вероятность прорастания обезвоженных спор увеличивается после замачивания их в стерильной воде. Простерилизуйте в течении 30 минут при 1,05 ат (15 psi) пипетку или шприц и пробирку с водой или колбу Эрленмейера на 25-250 мл с горлышком заткнутым ватным тампоном (лучше ватной пробкой, делается также как для пробирок — прим. ред.) и накрытым алюминиевой фольгой. Возьмите немного спор на кончик скальпеля и опустите их в стерильную воду. Плотно закройте и дайте отстояться 6-12 часов. Выждав положенное время наберите немного воды со спорами в пипетку или шприц и проинокулируйте несколько чашек с агаром одной или двумя каплями. Помните о том, что споровый отпечаток обычно берётся в нестерильных условиях и таким способом вы даёте возможность прорасти не только грибным, но и спорам контаминантов.
Характерные признаки грибного мицелия
Независимо от способа инокуляции или проращивания, заражение на любых начальных стадиях станет заметно уже на сроке от трёх до семи дней. Прорастающие споры выглядят как нитеподобные состоящие из клеток волоски исходящие из точки происхождения. Эти ниточки мицелия поначалу серые и разрозненные вскоре становятся белыми по мере ветвления соединяются перемычками, разрастаются и распространяются по носителю.
Мицелий большинства видов, таких как Agaricus, Coprinus, Lentinus, Panaeolus и Psilocybe на вид имеет цвет от сероватого до белого. Другие виды имеют различную пигментацию мицелия. Мицелий Lepisfa nuda может быть заметно багрянисто-синим; у Psilocybe tampanensis часто разноцветный с уклоном в коричневые тона. Помните, однако, что цвет мицелия зависит даже от штамма или используемого типа субстрата. Другая сторона внешнего вида мицелия — это какой тип роста он показывает: воздушный или плотный, пушистый или корнеподобный. Воздушный мицелий может быть отличительной чертой вида или результатом избытка влаги. Плотный мицелий тоже может быть признаком вида или показателем сухих условий произрастания. Более детально типы мицелия обсуждаются ниже в подразделе о сегментировании.
После того как мицелий был определён как грибной, места произрастания спор следует перенести в новые чашки Петри с агаром. Таким образом, грибовод выборочно изолирует грибной мицелий, и вскоре получает чистую, свободную от заражений культуру. Если одновременно с мицелием на агаре появились признаки заражения, то участки с проросшим мицелием следует вырезать и удалить от колоний контаминантов. Т. к. большинство распространённых контаминантов это плесени размножающиеся спорами, будьте осторожны и постарайтесь не трясти ёмкость с культурой, и не делайте ничего, что могло бы рассыпать споры. Также перед тем как резать агар убедитесь, что скальпель охлаждён. Раскалённый скальпель при соприкосновении с агаром произведёт реактивный выброс пара, что в пределах пространства чашки Петри вызовет перемещение воздуха и рассеет споры соседствующих плесеней.
Ответвления мультиспоровой культуры
Мультиспоровая культура это наименее сложный способ получения жизнеспособного мицелия, но не абсолютно чистого штамма. Прорастая в большом количестве, споры фактически создают множество штаммов, некоторые из которых несовместимы с другими, обладают разными потенциалами роста и нуждаются в различных условиях для плодоношения. Такая смесь штаммов подавляет рост более активных из них. В целом штаммы, полученные из спор, с большой вероятностью наследуют свойства своих предков. Если родители быстро захватывали субстрат и хорошо плодоносили в лабораторных условиях, то можно ожидать схожего поведения и от потомства. Культуры же, полученные от дикорастущих образцов, но испорченные в искусственных условиях, обычно плодоносят плохо. Как и в случае с дикорастущими растениями, штаммы дикорастущих грибов необходимо совершенствовать селекцией.
Из многих штаммов получаемых из спор некоторые могут быть способны только на вегетативный рост. Такой мицелий может усваивать питательные вещества, но не способен образовывать плодовые тела (следствие генеративного роста). Клеточная сеть, растущая из единственной споры, называется монокариотической. Монокариоты не способны к производству спорообразующих плодовых тел. При встрече и слиянии двух совместимых монокариотов происходит обмен цитоплазматическим и генным материалом. Полученный в результате дикариотический мицелий уже может производить плодовитое потомство. Сетеобразное объединение ветвей различных дикариотических штаммов называется анастомоз. Такая рекомбинация возможна на любой стадии выращивания мицелия: на агаре, зерне, или уже в бедном субстрате. Подобные пересечения грибных штаммов аналогичны созданию гибридов в садоводстве.
Другой способ создания культуры заключается в выделении отдельных спор разбавлением в объёме стерильной воды. Далее эта споровая взвесь разводится ещё большим количеством стерильной воды, которое уже в свою очередь и используется для инокуляции чашек с носителем. В этом случае культиватор получает возможность наблюдать за отдельными монокариотами и самостоятельно управлять процессами слияния для выведения высокоурожайных штаммов.
Грибоводы, нуждающиеся исключительно лишь в получении жизнеспособных культур, эту технику могут опустить, т. к. их должно полностью удовлетворить мультиспоровое разведение. Но для тех, кто заинтересован в скрещивании монокариотических штаммов и изучении характеристик получаемых таким образом культур, этот метод окажется бесценным. Помните, что из сотни спор прорастает в среднем от одной до пяти. Штаммы и генетика штаммов более детально обсуждаются в Главе XV.
Наибольшая опасность в приготовлении концентрированных мультиспоровых взвесей скрывается в увеличенной вероятности заражения, особенно бактериального. Некоторые бактерии паразитируют на клеточных оболочках мицелия, тогда как другие стимулируют прорастание спор для дальнейшего перемещения и медленного переваривания самого мицелия. Поэтому некоторые штаммы нездоровы изначально и обычно ассоциируются с высоким уровнем заражений. При попытке прорастить споры в очень большом количестве, те из них, что уже инфицированы, увеличивают вероятность распространения болезни на соседние.
Многие грибы, тем не менее, образуют уникальные симбиотические связи с другими микроорганизмами. Как ни удивительно, некоторые бактерии и дрожжи стимулируют развитие спор, которые в случае стерильной культуры было бы сложно прорастить. Споры Cantharellus cibarius, обычной и высоко ценимой лисички, не прорастали в искусственных условиях, противостоя усилиям лучших микологов мира. Но относительно недавно шведский миколог Nils Fries (1979) установил, что при добавлении в среду активированного угля и красных дрожжей (Rhodotorula glutinis (Fres.) Harrison) споры вскоре успешно прорастают. (Использование активированного угля рекомендуется для любых грибов с затруднённой всхожестью спор.)
Многие грибоводы сообщают, что определённые культуры пышно разрастаются при случайном заражении или намеренном внесении бактерий. Было установлено что Pseudomonas putida, Bacillus megaterium, Azotobacter vinelandii и некоторые другие микробы оказывают схожий эффект на различные виды грибов — и на прорастание спор, и на рост мицелия или образование плодовых тел. (Curto и Favelli, 1972; использование этих бактерий рассматривается в Приложении III). Однако большинство контаминантов с которыми приходится сталкиваться при разведении грибов, перенесены ли они воздушным путём или уже находились на спорах, делу не помогают. Из всех конкурентов наиболее пагубны бактерии. Прилежное соблюдение норм лабораторной гигиены, использование НЕРА-фильтров и правильные методы лабораторной работы призваны справится с этой напастью.