Введение РАВ анисового масла с канцерогеном практически не влияло на образование КБА, вызывая лишь снижение частоты регистрации 3-ОАК-антигенов в печени мышей: из 5 подопытных животных 3-ОАК-антиген был обнаружен в печени 2 мышей. В этой группе животных РАВ анисового масла оказывали стимулирующее действие только на образование АОК, которых было достоверно выше, чем у мышей, получавших один канцероген. Число РОК в этой группе было ниже, чем в контроле, в селезенке (13,5) и лимфатических узлах (24,3), а в вилочковой железе, так же как и у мышей, получавших один бензидин, отмечалась инволюция.
Одновременно введение РАВ эвгенола с канцерогеном вызывало снижение образования КБА только в печени животных: из 5 подопытных мышей 3-ОАК-антигены и бензидин-антигены были обнаружены в печени у одного животного. Эвгенол оказывал некоторый защитный эффект на число АОК и РОК в селезенке мышей, значения которых были выше, чем у мышей, получавших бензидин, но ниже, чем в контроле: число РОК в селезенке мышей этой группы составляло 19,1, в вилочковой железе — 13,1 и в лимфатических узлах — 20,3.
РАВ пихты при введении одновременно с бензидином не влияли на частоту регистрации КБА в печени животных, но вызывали снижение их образования в сыворотке крови мышей: из 5 подопытных животных КБА, содержащие бензидин и 3-ОАК, были обнаружены в сыворотке крови только одного животного. Эти РАВ оказывали защитное действие на число АОК, которое было достоверно выше, чем в группе мышей, получавших один бензидин, но ниже, чем в контроле, и препятствовали инволюции вилочковой железы — число РОК в нем (18,5) не отличалось от соответствующего значения в контроле (18,0), но не влияло на число РОК в селезенке (19,0) и лимфатических узлах (24,8), которое достоверно не отличалось от соответствующих значений в группе мышей, получавших один канцероген.
РАВ масла лавра при одновременном введении с бензидином вызывали снижение процента обнаружения 3-ОАК-антигена в сыворотке крови (66,7%) и в печени животных (17,6%) и бензидин-антигена в печени мышей — до 5,9%. На появление бензидин-антигена в сыворотке крови мышей эти РАВ не оказывали влияния. Под действием РАВ лавра в группе этих мышей не наблюдалось снижения содержания АОК в селезенке (259,6) по сравнению с группой мышей, получавших бензидин, которое сохранялось на уровне значения у мышей контрольной группы (249,8); не отмечалось также снижение содержания РОК в селезенке (24,4), вилочковой железе (30,0), лимфатических узлах (33,2), характерного для животных, получавших бензидин.
РАВ эвкалипта при одновременном введении с бензидином не оказывали влияния на образование КБА, но способствовали увеличению числа РОК в селезенке (41,5), лимфатических узлах (42,4) и вилочковой железе (41,0) животных, которое было достоверно выше не только по сравнению с этим показателем в группе мышей, получавших один канцероген, но и по сравнению с группой контрольных животных. Однако в отличие от РОК число АОК в селезенке этой подопытной группы мышей (89,9) оказалось достоверно значительно ниже по сравнению не только с контрольной группой животных (249,8), но и с группой мышей, получавших один бензидин (145,2).
На основании полученных материалов исследований могут быть сделаны следующие выводы.
Из 8 испытанных ЭМ иммуностимулирующие свойства были обнаружены при действии шести видов эфирных масел — гвоздичного, жасминового, анисового, пихтового, эвкалиптового и масла лавра. При этом одни масла стимулировали преимущественно В-систему иммунитета (анисовое и пихтовое), другие — Т-систему иммунитета (масло лавра); наибольший интерес представляют РАВ, стимулирующие как В-, так и Т-системы иммунитета: гвоздичное, жасминовое и эвкалиптовое масла.
Антиканцерогенные свойства РАВ проявляются в торможении взаимодействия канцерогенов с белками и образовании КБА; они обнаружены при действии РАВ гвоздичного, шалфеиного, жасминового, анисового, лаврового, пихтового масел, эвгенола. При этом только РАВ гвоздичного и шалфеиного масел вызывали полное торможение образования КБА как в сыворотке крови, так и в печени животных. Остальные РАВ оказывали частичный эффект.
Введение всех исследованных РАВ одновременно с бензидином препятствовало иммунодепрессивному действию канцерогенов на В- и Т-иммунитет. При этом одни РАВ оказывали защитный эффект преимущественно на В-иммунитет (анисовое и пихтовое масло), в то время как другие — на Т-иммунитет (эвкалиптовое) и третьи — на Т- и В-системы иммунитета (РАВ шалфеиного, гвоздичного, жасминового, лаврового масел, эвгенола).
Представленные результаты экспериментальных исследований свидетельствуют о том, что РАВ, являясь эффективными природными регуляторами, могут блокировать взаимодействие канцерогенов с критическими мишенями клетки и препятствовать их иммунодепрессивному действию на Т- и В-системы иммунитета. Эти данные открывают широкие перспективы для их практического использования в качестве естественных антиканцерогенов при разработке новых методов снижения повышенного онкологического риска.
Во второй части работы мы исследовали рабочих резиновой промышленности. Результаты эпидемиологических исследований свидетельствуют о повышенном риске развития у них злокачественных новообразований легкого, желудка, толстой кишки, мочевого пузыря, кроветворной и лимфатической систем, поджелудочной, предстательной, щитовидной желез и т.д.
Показано, что маркерами повышенного онкологического риска у них могут быть КБА, содержащие экзогенные канцерогены — бензидин и 2-нафтиламин, являющиеся одними из производственных факторов повышенного риска в резиновой промышленности, а также эндогенный канцероген 3-ОАК, регистрируемый в сыворотке крови рабочих.
Для проведения АТ была отобрана группа рабочих (50 человек) с повышенным онкологическим риском, в сыворотке крови которых были обнаружены КБА, содержащие бензидин, 2-нафтиламин или 3-ОАК. АТ проводилась путем ингаляционного введения рабочим РАВ шалфейного и гвоздичного ЭМ в концентрациях, близких к природным, в течение 15 дней.
До и после АТ у рабочих определялись следующие показатели:
канцероген-белковые аддукты трех типов — содержание бензидина, 2-нафтиламина или 3-ОАК;
количественное содержание иммунных комплексов (ИК);
количественное содержание иммуноглобулинов;
иммуносупрессивное действие сыворотки крови рабочих.
КБА определяли методом встречной иммунодиффузии в агаре. Тест-системой для определения КБА служили иммуносыворотки кроликов, содержащие антитела против канцерогенов как гаптенов. Для иммунизации кроликов и получения иммуносывороток были использованы синтетические, содержащие канцерогены бензидин, 2-нафтиламин и 3-ОАК-азопротеины. Азопротеины получали путем диазотирования аминогрупп канцерогенов и последующего азосочетания полученных диазосоединений с альбуминами лошадиной сыворотки крови.
Содержание иммуноглобулинов и ИК определяли для оценки воздействия на гуморальный иммунитет рабочих РАВ, играющих важную роль в противоопухолевой защите организма. Образование ИК антиген — антитело отражает фазу нормального иммунного ответа, направленного на удаление чужеродных веществ. Все экзо- и эндоантигены, в том числе и КБА, можно считать индукторами образования ИК. Предполагается важная роль ИК в иммунорегуляции: взаимодействуя с клеточными рецепторами, ИК могут модулировать Т- и В-системы иммунитета. В связи с этим определение ИК у рабочих до и после АТ представляет интерес как для оценки гуморального иммунитета, так и для исследования степени воздействия на него КБА. Для определения количества ИК использовали метод, основанный на селективной преципитации комплексов антиген — антитело в 3,75% полиэтиленгликоле с последующим фотометрическим определением плотности преципитата. Количественное определение IgA, IgM и IgG проводилось при помощи метода иммунодиффузии по Манчини. Иммуносупрессивное действие сыворотки крови рабочих определяли путем исследования ее влияния на образование антителообразующих клеток (АОК) к эритроцитам барана (ЭБ) у мышей линии BALB/C в реакции локального гемолиза в геле.
Тест подавления сывороткой крови больных АОК к ЭБ был предложен для иммунодиагностики рака легких. При помощи этого теста было показано, что количество АОК к ЭБ у мышей, которым вводили сыворотку крови рабочих, содержащую КБА, статистически достоверно ниже, чем в селезенке мышей, которые получали сыворотку крови рабочих, не содержащую КБА. Следует отметить, что вопрос о роли и значении гуморальных иммунодепрессантов имеет общебиологическое значение и широко используется при различных патологических состояниях, в том числе и при опухолях. В сыворотке крови онкологических больных обнаружены гуморальные факторы, которые ингибируют самые различные иммунологические реакции, причем супрессия может носить как специфический, так и неспецифический характер. В связи с этим изучение гуморальных супрессивных факторов у рабочих с профессиональным онкологическим риском до и после АТ представляет значительный интерес как для разработки критериев оценки эффективности ароматерапии риска, так и для дальнейшего изучения механизмов этиопатогенеза профессиональных опухолей. Для стандартизации данных, полученных в нескольких опытах, в связи с тем что количество АОК в контроле может значительно варьировать от опыта к опыту, результаты определения АОК рассматривали в виде коэффициента иммунного ответа (КИО):