В 1753 г. эта территория была разделена на вновь образованную Новую Сербию со столицей в Елисаветграде (нынешний Кировоград), где поселилась часть запорожских казаков, объединенных в Новослободской полк, и Славянскую Сербию со столицей в Бахмуте (нынешний Артемовск), населенную выходцами из российских губерний и балканских провинций, которая растянулась вдоль всей Украинской пограничной линии. Именно на этой территории, где сейчас расположены ряд районов Полтавской, Запорожской, Днепропетровской и Донецкой областей, в 1764 г. императрица Екатерина II учредила Новороссийскую губернию, центром которой стал Кременчуг.
В том же году Екатерина II окончательно ликвидировала гетманское правление и учредила в Глухове Малороссийскую коллегию, которую возглавил генерал-фельдмаршал граф П.А. Румянцев. Затем в 1765 г. императрица издала именной манифест, в соответствии с которым все слободские полки были преобразованы в регулярные Харьковский уланский и Сумской, Острогожский, Ахтырский и Изюмский гусарские полки и на территории их расквартирования учреждена Слободско-Украинская губерния, административным центром которой стал Харьков.
Новый этап освоения Малой и Новой России и расширения южных рубежей Российской империи был связан с именами выдающихся государственных деятелей, полководцев и флотоводцев Г.А. Потемкина, А.В. Суворова, П. А. Румянцева, А. М. Голицына, Ф. Ф. Ушакова, Г.А. Спиридова, С.Г. Грейга и других. Именно их военными талантами и беспримерным ратным подвигом сотен тысяч русских офицеров, солдат и матросов России довелось выиграть две тяжелейшие войны с Османской империей. В результате первой Русско-турецкой войны (1668-1774) был подписан Кючук-Кайнарджийский мирный договор, по условиям которого: 1) к России отошла территория причерноморского лимана между Южным Бугом и Днепром, где располагалась турецкая крепость Кинбурн; 2) Россия закрепила за собой ряд крепостей на Керченском полуострове, в том числе Керчь и Ени- Кале; 3) Турция признавала независимость Крымского ханства, который стал протекторатом Российской империи.
После окончания первой Русско-турецкой войны по указу Екатерины II Запорожская Сечь для усиления дисциплины войск и прекращения политических шатаний была административно расформирована. Вместо нее на днепровских порогах началось строительство Днепровской оборонительной линии, главным центром которой стала Александровская крепость (Александровск) – нынешний город Запорожье, а территория Запорожского войска вошла в состав Новороссийской и Азовской губерний.
Во второй половине 1770-х гг. светлейший князь Г.А. Потемкин, который приложил колоссальные усилия по освоению Новороссийского края, основал здесь три новых города – Екатеринослав (1776) (нынешний Днепропетровск), Херсон (1778) и Павловск (1780) (нынешний Мариуполь). В 1780-1782 гг. после утверждения Екатериной II «Общего положения о российских губерниях» и ликвидации Малороссийской коллегии, на территории Малороссийской и Слободско-Украинской губерний были учреждены Киевское и Харьковское наместничества, которые возглавили генерал-фельдмаршал П.А. Румянцев и генерал-аншеф Д.А. Норов.
В апреле 1783 г., после подавления очередного ан- тироссийского мятежа, организованного турецкими агентами, Екатерина II издала Манифест о присоединении Крымского ханства к Российской империи: «Ради попечения о благе и величии Отечества, стараясь пользу и безопасность его утвердить, как равно полагая средством навсегда отдаляющим неприятные причины, возмущающие вечный мир между Империями Всероссийскою и Оттоманскою заключенный, решились Мы взять под Державу Нашу полуостров Крымский, остров Тамань и всю Кубанскую сторону». Сразу после издания этого манифеста русские войска под командованием генерал-аншефа А.В. Суворова вошли в Крым и по приказу светлейшего князя Г.А. Потемкина вблизи развалин древнего Херсонеса заложили город Севастополь, которому суждено было стать главной базой Черноморского ВоенноМорского флота Российской империи.
Присоединение Крыма к России стало одной из главных причин начала второй Русско-турецкой войны (1787-1791), по итогам которой был подписан Ясский мирный договор. По условиям этого договора: 1) Стамбул признал вхождение Крымского хана в состав России; 2) к Российской империи отходили пограничные территории между Бугом и Днестром. Причем еще до окончания этой войны по указанию фельдмаршала Г.А. Потемкина началось ускоренное освоение этих земель, вошедших в состав Новороссийской губернии. Именно тогда здесь были основаны такие города, как Николаев (1789), Одесса (1794), Тирасполь (1795), и другие.