З. Анализ свойств нефиксированных эритроцитов /на основе методик количественной и качественной оценки состояния клеток/ в норме, при нарушениях ионного состава плазмы /диффузный гломерулонефрит/, содержания глюкозы /сахарный диабет/ и при нарушениях свойств мембраны эритроцитов /наследственный микросфероцитоз/
4. Сравнительная характеристика эритроцитов в норме и наследственном микросфероцитозе в исследованиях in vitro при индуцированных изменениях формы клеток от дискоидальной до сферической /количественная и качественная оценка/.
Научная новизна.
Количественные данные, полученные на препаратах без изменения нативных свойств клеток с использованием оригинальных количественных методик интерференционного анализа, указывают на однозначную взаимосвязь между формой, размерами эритроцитов, массой и концентрацией в них гемоглобина. Характер взаимосвязи одинаков для эритроцитов в норме и при наследственном сфероцитозе /НС/. Выявлено полное отсутствие истинных сфероцитов в плазме крови детей больных НС. Установлено, что увеличение сферичности эритроцитов при данном заболевании связано с уменьшением площади поверхности клеток. Исследование in vitro явления перехода эритроцитов от двояковогнутого диска к сфере в норме и при НС показало, что этот переход в обоих случаях представляет собой последовательный обратимый процесс, однако форма поверхности эритроцитов сферической формы в норме и при НС различна. Установлено, что переход от диска к сфере у эритроцитов больных НС происходит при меньших физико-химических воздействиях, что указывает на увеличенную способность эритроцитов к сферуляции при данном заболевании.
Практическая ценность.
Результаты работы, начиная с 1978 года, внедрены в практику в Той детской клинической больнице г. Москвы, применяются в научно-исследовательской работе лаборатории гормонально обменной диагностики и кафедры факультетской педиатрии 2го МОЛГМИ им. Н.И.Пирогова, лаборатории цитобиохимии МНИИ педиатрии и детской хирургии МЗ РСФСР. Результаты исследований по разработке оптической схемы голографического микроскопа для анализа фазовых объектов малых размеров. (5-10 мкм) используются в ‚научно-исследовательской работе группы "Голографическая микроскопия" ВНИИ оптик физических измерений.
Публикации.
По материалам диссертации опубликовано 5 работ.
Апробация диссертационного материала.
Результаты работ докладывались на:
1. 4ом Всесоюзном семинаре "Физические методы и вопросы метрологии биомедицинских измерений", Москва, 1976 г.
2. Первом Всесоюзном научно-техническом симпозиуме "Оптическое приборостроение и голография", Львов, 1976 г.
3. Первой Всесоюзной конференции "Средства и методы квантовой электроники в медицине", г. Саратов, 1976 г.
4. 4ой Енисейской биофизической конференции "Механизмы регуляции эритропоэза", г. Красноярск, 1978 г.
5. Заседании гематологической секции общества педиатров г. Москвы /предс. чл.корр. АМН СССР Н.С. Кисляк/, г. Москва, 1980 г.
6. Заседаниях Научного Совета по проблеме "Голография" при АН СССР /предс. чл.корр. АН СССР Л.Д.Бахрах/, г. Москва, г. Ленинград, 1980 г.
7. Заседании Научного Совета кафедры "Физика твердого тела" Московского инженерно-физического института, г. Москва, 1981 г.
8. Заседании Ученого Совета МНИИ педиатрии и детской хирургии МЗ РСФСР /дир. проф. Ю.Е.Вельтищев/, г. Москва, 1981 г.
Структура работы.
Диссертация изложена на 176 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, трех глав собственных исследований, включающих описание методик анализа эритроцитов методами оптической голографии и экспериментальных исследований, заключения, выводов и приложения. Библиографический указатель содержит 137 источников литературы. Работа иллюстрирована 45 рисунками и 13 таблицами.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Материалы и методы исследования
В качестве материала исследования были взяты эритроциты периферической крови здоровых /20/ и больных детей: 5 с сахарным диабетом, 6 с диффузным гломерулонефритом, 12 с наследственным микросфероцитозом в возрасте от 6 до 12 лет. Обследовались эритроциты родственников детей, больных НС. В 2х случаях анализировались эритроциты, выделенные из удаленной по поводу НС селезенки.
Забор крови производился из локтевой вены. Для анализа использовалась гепаринизированная кровь в объеме 0,5+1,0 мл, не позднее чем через час после забора крови. Эритроциты исследовались при комнатной температуре /t =20-22⁰ С/ в аутоплазме или в физиологическом растворе в зависимости от типа эксперимента. Взвесь эритроцитов разделялась на две части. Первая часть /0,1 – 0,3 мл/ помещалась под микроскоп, далее проводилось фотографирование или микрокиносъемка интерферограмм и изображений клеток в лазерном свете. Интерференционные картины, снятые на фотопленку, обрабатывались по разработанным методикам расчёта интерферограмм. Вторая часть эритроцитов /0,3 – 0,4 мл/ отбиралась для измерения на рефрактометре показателя преломления внутри и вне клеток.