Если хищные грибы, улавливающие нематод, обнаружены, то их следует по возможности выделить в чистую культуру. При наличии спор этих грибов выделение произвести легко, сняв споры с вершины воздушного конидиеносца при помощи стерильной иглы с очень небольшой частицей стерильного агара на конце и перенеся их в чашку с кукурузным агаром. Лучше всего эту операцию производить под бинокулярным микроскопом. Выбрав конидиеносец с удобным расположением спор, нужно поднять объектив микроскопа примерно на 1 см, навести фокус на конец иглы и, сохраняя ее в поле зрения, опускать объектив до тех пор, пока цель не появится в поле зрения. Подобный способ дает возможность осторожно подвести иглу к споре и избежать опасности случайного прикосновения к поверхности агара. Любая попытка подвести иглу к спорам, сохраняя последние в фокусе, неизбежно оканчивается неудачей.
Грибы, улавливающие нематод, обычно хорошо растут в чистой культуре на агаре, сваренном на кукурузном отваре, но они, как правило, не образуют ловушек до тех пор, пока не появятся нематоды. Чтобы вызвать образование ловушек, лучше внести небольшое количество гриба в культуру нематод, чем добавлять нематод в чистую культуру гриба.
Может случиться, что культура начнет катастрофически высыхать прежде, чем полностью закончится исследование найденных в ней интересных грибов. В таких случаях ее можно омолодить, налив слой свежего агара сверху старого; агар предварительно следует охладить примерно до температуры его затвердевания, как это делается при постановке почвенных культур. Агар для этой цели следует применять или чистый, или приготовленный на слабом настое кроличьих экскрементов, так как если вновь добавляемая среда будет богата питательными веществами, то начнется чрезмерно сильное развитие плесневых грибов.
При предварительном исследовании культур с чашки Петри снимают крышку и внимательно осматривают поверхность агара при помощи 16-миллиметрового объектива. Бинокулярная лупа не пригодна для этой цели, так как при обнаружении интересного экземпляра последний нужно сейчас же исследовать при помощи более сильного объектива. Я установил, что для предварительного просмотра наиболее удобен 9-миллиметровый объектив; поле зрения его достаточно велико и позволяет быстро просмотреть всю поверхность культуры, а в случае необходимости более подробного исследования можно путем замены окуляра, дающего шестикратное увеличение (Х 6), окуляром X 15 обеспечить требуемое увеличение изображения. На этой стадии исследования следует искать мертвых нематод, особенно если они встречаются группами, гифы, несущие ясно заметные ловушки, и споры хищных грибов.
Более детальное исследование интересующего нас материала можно производить in situ (на месте), поместив каплю воды на поверхность агара и закрыв ее покровным стеклом или, что еще лучше, используя сильный объектив с водной иммерсией. Однако при этом способе трудно обеспечить правильное освещение исследуемого объекта, так что для детальных наблюдений следует приготовить специальный препарат[36]. Проверочные исследования хищных грибов следует всегда производить на живом неокрашенном материале, если только не требуется изучить различные явления в клеточных ядрах, так как ввиду нежного строения грибов они мало пригодны для изготовления постоянных препаратов.
Для подготовки свежего материала к исследованию нужно вырезать участок агара из культуры и лезвием бритвы срезать с него поверхность, несущую интересующий нас гриб. Полученный тонкий срез агара можно затем поместить в воду, используя для этого предметное стекло с углублением (для висячей капли). Этот способ дает возможность вести дальнейшие исследования в наилучших условиях. Неудобство этого метода заключается в толщине предметного стекла, которая обычно не допускает использования апланатического конденсора с большой апертурой для получения наибольшей резкости изображения: избежать этого неудобства сможет тот, кому удастся достать очень тонкое предметное стекло, какие иногда появлялись в продаже еще до войны. У меня имеется одно такое стекло, общая толщина которого меньше 1 мм; оно вполне пригодно для работы с апланатическим масляно-иммерсионным конденсором с численной апертурой 1, 4, и я храню его еще тщательнее, чем самый микроскоп!
36
Для работ этого типа (