Иногда толщина нематод может вызвать затруднения, так как 2-миллиметровый иммерсионный объектив может коснуться покровного стекла при фокусировании стороны животного, удаленной от наблюдателя. Трехмиллиметровый иммерсионный апохромат разрешает эту проблему, так как численная апертура этого объектива такая же, как у 2-миллиметрового, но сочетается со значительно более длинным фокусным расстоянием.
Чтобы собрать требуемые сведения о хищных грибах, необходимо изготовлять постоянные микроскопические препараты, хотя при этом надо еще раз со всей строгостью подчеркнуть, что всюду и везде, где это возможно, исследования нужно проводить на живом материале. Вполне удовлетворительные препараты можно приготовлять, пользуясь классическим лактофенольным методом. Объект помещают на предметное стекло в каплю лактофенола с анилиновой синей (cotton blue) и подогревают до тех пор, пока от жидкости не пойдет пар, после чего закрывают его покровным стеклом. Если обмазать края покровного стекла красным лаком для ногтей, то такой препарат можно с полным основанием считать постоянным. Описанный метод вполне пригоден для окраски и монтажа спор хищных грибов, равно как и для внутренних паразитов нематод, но для хищников типа Arthrobotrys и близких к нему форм он мало пригоден.
Для более нежных хищных грибов рекомендуется эритрозино-глицериновый способ. Кусочек агара с находящимся на нем экземпляром гриба вырезают из культуры и фиксируют в растворе формалина с уксусной кислотой следующего состава:
Продажного формалина - 10 частей
Ледяной уксусной кислоты - 5 частей
Воды - 85 частей
Фиксация должна продолжаться по крайней мере 24 часа, но материал можно без всякого вреда для него оставлять в этом фиксаторе на целые годы. В течение следующих 24 час. материал промывают несколько раз в воде. Поверхность куска агара с находящимся на ней грибом срезают бритвой и помещают в насыщенный водный раствор эритрозина не меньше чем на 30 мин.; перекрасить препарат невозможно, поэтому лучше оставлять его в краске на всю ночь. После краски материал 2—3 раза промывают в воде и переносят в каплю 10%-ного глицерина на часовое стекло, которое оставляют незакрытым, чтобы концентрация жидкости достигла уровня вязкости чистого глицерина. Процесс достижения первоначального объема длится около двух дней. Остатки воды извлекаются из препарата уже в эксикаторе, после чего экземпляр при возможно более низкой температуре монтируют в капле расплавленного глицеринового желе. При помощи описанного метода можно получать прекрасные препараты эндозойных хищных грибов; он вполне пригоден и для большинства свободноживущих хищных грибов. Образцы Dactylella ellipsospora, показанные на рис. 17 и 18, смонтированы вышеуказанным способом.
Постоянные препараты хищных грибов в канадском бальзаме приготовить нелегко, потому что и споры и приспособления для ловли нематод имеют тенденцию сильно сжиматься в процессе обезвоживания. При условии очень медленного обезвоживания можно получить вполне удачные препараты в «Евпарале» (Euparal). Кусочки агара фиксируют в формалине с уксусной кислотой, отмывают и, как и в предыдущем случае, срезают бритвой тонкий слой агара с грибом. Затем срезы агара слегка окрашивают гематоксилином Делафилда; допускать чрезмерно сильного окрашивания не стоит, так как дифференциация подкисленным спиртом редко бывает успешной. После окраски материал «подсинивают» парами аммиака и очень медленно обезвоживают, применяя постепенно повышающиеся концентрации спирта; когда обезвоживание заканчивается перенесением в абсолютный спирт, материал можно промыть в «экстракте Евпарала» и монтировать в «Евпарал» на предметных стеклах, лучше с углублениями, ввиду толщины срезов агара.
Если срезы агара хотят монтировать в канадском бальзаме, то их предварительно следует просветлить в терпинеоле, но этот метод не рекомендуется. Просветлять препараты в ксилоле можно только в том случае, если исследователь не боится длительного процесса обезвоживания, в течение которого препарат проводят через постепенно повышающиеся концентрации ксилола в абсолютном спирте.
В литературе описываются и другие, более сложные, методы получения хороших препаратов хищных грибов в канадском бальзаме или в венецианском терпентине; ссылки на эти работы имеются в нашем списке литературы.
ПРИЛОЖЕНИЕ 2
ДЛЯ ЛЮБИТЕЛЯ
Изучение хищных грибов представляет собой увлекательное занятие для микроскописта-любителя. Грибы легко найти и вырастить в культуре. Детали их строения настолько изящны, что вполне оправдывают энтузиазм любителя, который с наслаждением применяет в таких случаях свое умение использовать предельную разрешающую способность своего микроскопа, тогда как самый процесс охоты за нематодами он может наблюдать при малом увеличении. В распределении и экологии нематод многое еще требует изучения и легко предположить, что многие новые виды еще ожидают своего открытия. Любителя, пожелавшего заняться их изучением, не должно пугать отсутствие лаборатории, так как необходимое для этой цели оборудование, за исключением микроскопа, имеется в любом доме или же его можно наскоро устроить.