Линкольн, казалось, примирился с мыслью, что когда-нибудь его недруги добьются своего. Газета "Вашингтон кроникл" приводила его высказывание: "Единственный надежный способ уберечь президента — это посадить его в железный ящик. Там он будет, конечно же, в безопасности, но зато не сможет выполнять свои обязанности".
Линкольн просматривал почту до II часов, а затем отправился на заседание кабинета, на котором присутствовал генерал У.С. Грант — герой гражданской войны, приведшей к объединению Америки на демократической основе. Когда совещание закончилось, президент спросил Гранта, не смогут ли генерал и его жена сопровождать его и госпожу Линкольн в театр Форда. Чете Линкольн хотелось посмотреть игру знаменитой актрисы Лауры Кин в комедии Тома Тэйлора "Наша американская кузина". Грант отказался, сославшись на то, что он должен вечером вернуться в Нью-Джерси для встречи с сыновьями. Генерал Грант и не подозревал, что эта встреча спасет ему жизнь.
О том, что президент Линкольн собирается в этот вечер посетить театр Форда, было известно его актерам. Особое внимание на это обратил Джон Бут. Один из ведущих актеров театра, он ненавидел Линкольна за его политику, которая, по мнению этого ярого экстремиста-южанина, привела к гражданской войне. Бут и его сообщники вошли в сговор с целью убийства президента. Обсуждались многие варианты, включая план похищения Линкольна и использование его в качестве заложника для обмена на арестованных конфедератов-южан. В конце концов заговорщики пришли к выводу, что наиболее эффектным и драматичным будет публичное убийство президента, а также последующее устранение вице-президента Эндрю Джонстона и госсекретаря Уильяма Сьюарда. Предстоящее посещение Линкольном театра давало Буту идеальную возможность привести в исполнение намеченное. 14 апреля он встретился со своими друзьями-заговорщиками Джорджем Ацеротом, Сэмом Арнольдом, Дэвидом Хэролдом и Льюисом Пейном в вашингтонском пансионе, хозяйкой которого была Мэри Сарротт.
За бутылкой виски заговорщики обсуждали свои роли в осуществлении задуманного заговора. Сэм Арнольд в конце концов вышел из их группы, отказавшись от участия в покушении. Роли были распределены следующим образом: Пейн и Хэролд "берут на себя" госсекретаря Уильяма Сьюарда, Ацерот — вице-президента (когда пришло время действовать, горе-убийца напился в кабаке), а в президента должен был стрелять Джон Бут.
Президентская чета в сопровождении друзей — майора Генри Рэтбоуна и его невесты мисс Клары Харри — прибыла в театр после восьми часов вечера. Спектакль уже начался, но актеры были вынуждены прекратить игру, так как публика в зале — около двух тысяч человек — встала и оркестр заиграл приветствие. Президент и его свита устроились в ложе, после чего действие возобновилось.
В 9.30 вечера Бут, одетый во все черное и загримированный, подъехал к театру верхом на лошади. Он хорошо подготовился к выполнению своей задачи: нож на поясе, два кольта в карманах сюртука и взведенный револьвер — в руке.
Один из президентских охранников, Джон Паркер, оставил свой пост у входа в ложу и отправился в бар. Бут следил за действием в ожидании удобного момента. Воспользовавшись оплошностью охранника, Бут вошел в президентскую ложу и с возгласом "Смерть тиранам!" спустил курок. Пуля пробила голову президента и застряла в области правого глаза.
Майор Рэтбоун вскочил, пытаясь задержать убийцу. Но тот выхватил нож и, ранив офицера, спрыгнул из ложи на сцену. Он запутался в занавесе и упал на подмостки, сломав ногу выше колена. Но даже это не помешало
преступнику в возникшей суматохе выбраться из театра. Вскочив на лошадь, убийца исчез в ночи.
Тяжело раненного президента в кресле-качалке осторожно перенесли из театра в один из близлежащих домов. Прибывший по срочному вызову врач сделать ничего не смог. Наутро президент скончался.
Через несколько минут после выстрела Бута его сообщник Льюис Пейн пробрался в дом государственного секретаря Уильяма Сьюарда и нанес ему удар ножом. Однако рана оказалась не смертельной. Ацерот, который должен был убить вице-президента, струсил, напился и, чтобы отвлечь от себя подозрения, весь вечер просидел в кабаке.