Ближе к окончанию эструса вагинальные выделения претерпевают характерные изменения (снова выявляются эпителиальные клетки, содержащие ядро, и появляется большое количество лейкоцитов). Такая картина обычно наблюдается через 7–9 дней после пика ЛГ и известна как «вагинальный мазок метэструса». Изменению характера выделений предшествует переходный период, характеризующийся возрастающим количеством активных клеток и указывающий на окончание фертильного периода и эструса (табл. 1.1).
Вагинальная цитология весьма информативна в плане определения фазы эстрального цикла, однако значительные расхождения во времени появления основных признаков эструса по отношению к пику фертильности ограничивает применение указанной методики.
Вагинальная эндоскопия
Прекращение секреции эстрадиола фолликулами и переход их к секреции прогестерона приводят к снижению как отечности, так и васкуляризации слизистых оболочек, что сопровождается выраженным изменением характера вагинальных выделений, выявляемым с помощью вагинальной эндоскопии. На стадии проэструса слизистая оболочка становится более выпуклой и отечной, затем наблюдается ее уменьшение; по мере приближения овуляторного пика слизистая сжимается и бледнеет, в некоторых случаях становясь практически белой (фиг. 1.1). Перечисленные изменения свидетельствуют о приближении стадии, характеризующейся постепенным повышением концентрации прогестерона перед овуляцией и последующим наступлением фертильного периода. Эти изменения легко узнать, имея даже небольшую практику (фиг. 1.3), кроме того, они настолько воспроизводимы, что по набору признаков их можно оценивать полуколичественно. Вагинальная эндоскопия весьма полезна в определении оптимальных сроков вязки. По окончании фертильного периода, т. е. в начале метэструса — слизистая оболочка влагалища бледнеет и истончается, складки становятся закругленными — и что, вероятно, является наиболее характерным признаком, — слизистая в переднем отделе влагалища выглядит раздраженной и при прикосновении быстро сжимается, образуя розетку.
Измерение концентрации гормонов
Данные о концентрации прогестерона в сыворотке крови могут служить ориентиром для определения фертильного периода у сук. Механизмы и динамика изменения концентрации прогестерона описаны в предыдущем разделе (фиг. 1.2).
В конце анэструса концентрация прогестерона в сыворотке крови находится на базальном уровне (и практически не определяется), к окончанию проэструса она повышается до низкой, но поддающейся определению отметки (около 3 нмоль/л или 1 нг/мл). И продолжает повышаться, достигая уровня 3–6 нмоль/л (1–2 нг/мл) к моменту овуляторного пика ЛГ; 2 дня спустя (в день овуляции) показатели достигают 6–12 нмоль/л (2–4 нг/мл), а к 4 дню (т. е. к началу фертильного периода) — 18–30 нмоль/л (6–10 нг/мл) (фиг. 1.1). Концентрацию прогестерона определяют в плазме крови, поскольку анализ других жидкостей (слюны и мочи) в настоящее время не дает точных результатов. Исследование проводят после появления первых признаков проэструса и повторяют по меньшей мере каждые 2–3 дня до окончания проэструса или начала поведенческого эструса. Такая методика позволяет выявлять стремительное нарастание концентрации прогестерона перед овуляцией и соответственно рассчитать дату возможной вязки. В случаях очень короткого проэструса исследование начинают раньше.
В зависимости от метода исследования (радиоиммунный или иммуноферментный) возможны некоторые расхождения в показателях концентрации прогестерона; при этом следует учитывать, что иммуноферментный метод дает завышенные, но в остальном надежные результаты. Большая часть опубликованных данных (включая данные, приведенные в настоящей главе) получены с помощью радиоиммунного метода. Готовые иммуноферментные тест-системы, предназначенные для определения концентрации прогестерона в плазме крови на различных стадиях эстрального цикла, дают результаты, почти вдвое превосходящие данные радиоимунного анализа (РИА), но в той же степени отражающие характерные циклические изменения. С помощью готовых наборов нельзя получить абсолютные показатели концентрации прогестерона, но можно проследить относительные изменения его концентрации от начала проэструса и до конца цикла.
Эндоскопическое исследование слизистой влагалища. Динамика изменений на протяжении цикла: (а) проэтрус — розовая окраска и отечность; (b) начало эструса — слизистая бледнеет, отек начинает уменьшаться (обычно перед пиком ЛГ); (c) середина эструса — слизистая бледная, уменьшение отека (сморщивание) явно выражено, что соответствует середине фертильного периода; (d) начало метэструса — видны закругленные складки, при прикосновении слизистая смыкается, образуя розетку (е) (см. Приложение)