Помимо описанной реакции преципитации в жидкой среде имеется ее модификация - реакция в гелеобразной среде. На стекло тонким слоем наносят растительное студневидное вещество - агар; по застывании в нем делают три лунки, куда помещают вытяжку из следа крови, вытяжку из контрольного участка материала вещественного доказательства и сыворотку, преципитирующую тот или иной вид белка. Если применена сыворотка, преци-питирующая белок человека, а след на вещественном доказательстве был образован человеческой кровью, между лунками с вытяжкой из следа и преципитирую-щей сывороткой через определенный срок появится осадок в виде полосы (иногда несколько полос) белого цвета (рис. 40). То же произойдет при взаимодействии вытяжки из следа крови свиньи и сыворотки, преципити-рующей белок свиньи, и т. д. Вместо вытяжек из следа крови и контрольного участка предмета-носителя в лунки можно помещать непосредственно соответствующие кусочки материала вещественного доказательства, добавляя к ним капли физиологического раствора.
Реакция преципитации в геле менее чувствительна, чем реакция в жидкой среде, но в некоторых случаях обладает преимуществами. Она может быть проведена с мутными объектами и дает перспективы успешного и более доступного дифференцирования крови филогенетически близких животных, например крупного и мелкого рогатого скота; лося и быка.
Для определения видовой принадлежности крови существуют и другие реакции, но они не получили распространения в отечественной судебномедицинской практике, требования которой, как правило, полностью удовлетворяются применением реакции преципитации (преципитирующие сыворотки, изготовляемые в нашей стране, обладают высокими качествами, а схема реакции преципитации хорошо разработана).
Установление групповой принадлежности. Выяснение происхождения крови на вещественном доказательстве от человека или животного имеет большее значение, чем просто констатация факта присутствия неизвестно от кого произошедшей крови. Однако в настоящее время судебномедицинская экспертиза располагает еще большими возможностями: имеются научные данные, позволяющие разрешить вопрос, может ли принадлежать кровь тому или иному человеку потерпевшему, подозреваемому или она произошла не от них. Разрешение его основано на данных об антигенной дифференцировке человеческого организма. Уже в начале XX столетия стало известно о существовании определенной закономерности во взаимодействии крови различных людей: сыворотка одних агглютинирует (соединяет в гроздевидные конгломераты) эритроциты других. Вначале были открыты четыре группы крови. Вещества, обусловливающие реакцию агглютинации, получили названия агтлютиногены (антигены) - в эритроцитах, агглютинины (антитела) -в сыворотке. Первые обозначают прописными латинскими буквами, вторые - малыми буквами греческого алфавита. Приняты международные обозначения групп: Осф, Ар, Ва, АВО. В нашей судебномедицинской практике буквенные обозначения до сих пор дополняют цифровыми (эту цифровую классификацию предложил Янский) --Оар(1), Ар(П), Ва(Ш), АВО (IV). Агглютинация происходит в том случае, когда во взаимодействие вступают одноименные агглютиногены и агглютинины: А и а, В и р. Символ "о" в группе АВ указывает на отсутствие в сыворотке крови этой группы агглютининов аир. Агглю-тиноген "О" обнаруживается специальными сыворотками анти-О(Н), изготовляемыми путем иммунизации коз дизентерийной спиртовой вакциной Григорьева-Шига, или экстрактами из семян некоторых растений, содержащими фитагглютинин (лектин) анти-Н. Выяснено, что реагенты, выявляющие агглютиноген 0, агглютинируют не только эритроциты группы 0(1), но и в подавляющем большинстве случаев эритроциты групп А (II) и В (III), а также нередко и эритроциты группы AB(IV). Таким образом, в группах А(П), В(III) и AB(IV) наряду с основными агглютиногенами - А и В может присутствовать еще агглютиноген, который обозначают прописной латинской буквой Н или именуют сопутствующим агглю-тиногеном 0.
В дальнейшем в крови человека открывали все новые и новые антигены и антитела. На смену учению о группах крови пришло учение об изосерологических системах. Четыре описанные группы вошли в эритроцит-арную изосерологическую систему АВО, три группы: М, N и MN, ранее известные под названием "типы крови", - в систему MNSs и т. д. В настоящее время насчитывается еще несколько эритроцитарных изосерологических систем: Р, Rh (резус), Ласерен, Даффи, Келл, Кидд, Диего и т. д., в которые входит много антигенов. Кроме того, оказалось, что в сыворотке крови содержатся особые антигены, которые позволили разделить человеческую кровь еще и на сывороточные изосерологические системы - -Cm,-Ос, Нр и др. Одна система Льюис является как бы промежуточной: входящие в нее антигены свойственны сыворотке, но одновременно фиксированы и на эритроцитах. Возможность различных сочетаний групповых факторов стала исчисляться сотнями тысяч, и появилась реальная перспектива достигнуть в будущем индивидуальной диагностики крови.
Групповые антигены изосерологической системы АВО, MNSs и Rh содержатся не только в крови, но и в фиксированных клетках тканей тела.
Таковы достижения гематологии и иммунологии, но не все они имеют одинаковое значение для судебноме-дицинской экспертизы вещественных доказательств в силу различных причин: затруднения в получении тех или иных стандартных сывороток для выявления соответствующих групповых антигенов; чрезмерно большая или, наоборот, малая частота встречаемости какого-либо антигена в крови населения данной страны; неустойчивость его в высохшей крови и пр.
Основное место в судебномедицинских исследованиях занимает изосерологическая система АВО; иногда в следах крови определяют группы систем Р, Льюис (в распоряжении экспертов имеются необходимые для этого стандартные сыворотки отечественного производства), Gm и др.
Судебномедицинский эксперт начинает проведение экспертизы с исследования образцов жидкой крови, для чего применяет реакцию агглютинации. Каждый образец крови разделяют на эритроциты и сыворотку. К исследуемым эритроцитам добавляют стандартные сыворотки а и р., а к исследуемой сыворотке - стандартные эритроциты групп А и В. Реакцию осуществляют в пробирках с применением центрифугирования и последующей микроскопической проверкой полученных результатов (таблица 1). Эритроциты дополнительно исследуют гетероиммунными сыворотками анти-А и анти-В, т. е. сыворотками, изготовленными путем иммунизации животных человеческими эритроцитами группы А или В, а также сывороткой анти-О(Н). Вместо последней нередко пользуются растительными экстрактами анти-Н.
Таблица 1
Схема определения групп изосерологической
Исследуемые Исследуемая эритроциты сыворотка + стандартные стандартные сыворотки эритроциты групп Группы крови
в а А В
- - + + 0а в (I) - + - + Ав (II) + - + - Ва (III) + + - - АВ0 (IV)
системы АВО в жидкой крови
Затем исследуют образцы крови, высушенные на марле, и контрольную марлю. Детальное изучение образцов крови потерпевших и подозреваемых необходимо для выяснения их особенностей, правильного выбора в каждом конкретном случае стандартных реагентов, методики и техники исследования, что обеспечивает успех экспертизы.
Далее определяют группы в следах крови на вещественных доказательствах, исследуя при этом контрольные участки предмета-носителя, взятые из мест, расположенных рядом со следами крови. Последнее делают для предотвращения ошибочных выводов, так как материалы вещественных доказательств, особенно загрязненные, могут неблагоприятно действовать на стандартные реагенты и имитировать наличие в крови того или иного группового фактора.
Основным методом обнаружения агглютиногенов в высохшей крови является метод абсорбции. Принцип его заключается в связывании агглютинина одноименным агглютиногеном. Делают три одинаковые навески материала из пятна крови и три таких же навески из соответствующего контрольного участка предмета-носителя. К одной из них добавляют сыворотку р или анти-В, к другой - сыворотку а или анти-А, к третьей - сыворотку анти-О(Н) или растительный экстракт анти-Н. Ингредиенты оставляют на 18 - 24 часа в рефрижераторе при температуре от + 4° до + 8°. Затем сыворотки (экстракт), находившиеся в контакте с исследуемыми объектами, т. е. абсорбированные, отделяют от материала и титруют стандартными эритроцитами: сыворотки |3 и анти-В эритроцитами группы В, сыворотки а и анти-А эритроцитами группы А, сыворотку анти-О(Н) и экстракт анти-Н эритроцитами группы 0.