Следующим шагом к сближению Литвы и Польши стало заключение в Городли в 1413 году Городельской унии, которая сравняла в правах польскую и литовскую шляхту. Тогда многие украинские и белорусские феодалы завязывали родственные отношения с польской знатью, принимали католичество, а Польша все больше контролировала литовские, украинские и белорусские земли. При поддержке Польши в Литве развернулась активная деятельность по ликвидации автономии украинских земель. Сначала автономию потеряли крупнейшие удельные княжества (Волынское, Новгород-Северское, Киевское, Подольское), где стали править великокняжеские наместники. В 50-х годах XV в. литовское правительство окончательно отменило деление Украины-Руси на княжества, и там появились воеводства, подчиненные Великому Литовскому князю. Но и на этот раз Польша еще полностью не овладела украинскими землями, так как Литва еще сохраняла суверенитет.
Окончательное слияние Польши и Литвы произошло по Люблинской унии в 1569 году. Причиной ее заключения было то, что в начале XVI века Литва была близка к упадку. С запада ей угрожал Тевтонский орден меченосцев. С востока окрепшее Московское государство заявляло претензии на все земли бывшей Киевской Руси и захватило Черниговщину и Смоленщину. С юга страну опустошали постоянные набеги крымских татар. Все это побудило правящую литовско-русскую феодальную верхушку к союзу с Польшей. Последняя также была заинтересована в дальнейшем укреплении двусторонних связей, выдвигая при этом главное условие — объединение Польши и Литвы в единое государство.
В 1569 году в Люблине созвали общий польско-литовский сейм, который узаконил образование государства Речи Посполитой. По польской государственной традиции, во главе государства был единственный король, которого избирал сейм. Одним из условий унии было отторжение от Великого княжества Литовского и присоединение непосредственно к Польше всех «русских» (украинских) земель. В их число входили вся Волынь, Подолье, Брацлавщина, Киевщина. Так вся Украина-Русь, границы которой тогда простирались на юге — по линии Каменец-Подольск — Умань — Днепр (с запада на восток); на востоке — Новгород-Северский, Стародуб, Глухов, Гадяч, Полтава (несколько восточнее), на севере — несколько южнее Припяти, а на западе — по Карпатам — отошла к Польше.
Люблинская уния имела самые серьезные последствия. Сразу же после ее заключения по просьбе польского короля из Рима в Польшу были посланы иезуиты, которые вскоре жестко взяли в свои руки дело распространения католичества на восток. Польские магнаты и шляхта, также хлынувшие на восток, начали ускоренными темпами вводить на Украине польский социальный порядок, известный полным бесправием крестьянства и ничем не ограниченным всевластием магнатов и своеволием шляхты. Вслед за магнатами и шляхтой двинулись на восток евреи в качестве арендаторов, торговцев и посредников, без которых не могла обходиться шляхта того времени.
Король начал щедрой рукой раздавать польским магнатам и шляхте «пустопорожние» земли. Фактически земли эти не были «пустопорожними», а на них, в условиях относительной свободы, жили крестьяне, но в Польше той эпохи владеть землей имела право только шляхта и монастыри. Поэтому вместе с пожалованием «пустопорожней» земли в зависимость от новых владельцев попадали и жившие на ней люди.
Новые владельцы, желая извлечь побольше дохода из своих владений, начали изощряться в накладывании и в взыскании с крестьян всяких налогов и поборов, как в деньгах так и в натуре и в бесплатном принудительном труде. Платили налог от «дыма», т. е. от жилья, «десятину» на церковь, особый налог на содержание польского войска. Кроме того, поляки принуждали крестьян строить мельницы и шинки (кабаки), которые обычно сдавались в аренду евреям. Самим же крестьянам запрещалось молоть зерно или производить водку дома, заставляя их пользоваться этими мельницами и шинками.
Зерно, яйца, птица, скот, воск и мед, пойманная рыба, сотканное полотно — все облагалось в пользу владельца земли и крестьянин должен был известную часть доставлять владельцу или арендатopy. Часть эта имела тенденцию все возрастать, так как и владелец, и арендатор старались выколотить возможно больше дохода. Жаловаться же на несправедливость было некому. Крестьянин находился в юрисдикции шляхтича, который не только его судил, но и мог накладывать наказания до смертной казни включительно. Кроме того, в новых землях начал вводиться и принудительный труд — барщина, уже давно введенная в Польше и Галиции. Сначала он ограничивался одним днем в неделю, но вскоре количество дней барщины начало быстро расти и доходить до 200 дней в году.