Было обнаружено, что для высвобождения и поддержания жизнеспособных протопластов, необходим изолирующий раствор, содержащий 9% маннитола. Выделенные протопласты имели округлую форму и были заполнены хлоропластами. Протопласты V. planifolia были больше по размеру (0,031 мм), чем у V. andamanica (0,022 мм), и их можно было отличить по расположению хлоропластов – периферических у V. planifolia и центрально разбросанных V. andamanica. Визуально различимая природа протопласта может быть использована для идентификации генетической трансформации у этих видов. Когда они подвергаются слиянию, опосредованному полиэтиленгликолем (PEG), то протопласты сливаются, образуя гетерокарион. Продукт слияния культивировали на жидкой среде МС с 0,5 м/л БА, 0,5 мг/л ИМК с добавлением 3% сахарозы и 7% маннитола в течение 20 дней. Развитие клеточной стенки вокруг продукта слияния наблюдали через 36 часов (Minoo et al., 2008). Технология слияния протопластов может быть очень полезной для переноса генов полезных признаков, наблюдаемых у V. andamanica, в V. planifolia, особенно естественного образования семян и устойчивости к болезням.
Будущее улучшения ванили
Ориентиры, достигнутые в виде различных технологий, могут быть эффективно использованы для создания спектра генетических вариаций ванили, тем самым преодолевая основное узкое место в программах селекции и улучшения культуры. Разработанная технология выделения и слияния протопластов может быть использована для передачи полезных признаков посредством получения соматических гибридов, тем самым уступая место генетическим манипуляциям с ванилью. Характеристика видов ванили, образцов, сеянцев, сомаклонов и межвидовых гибридов доказала существование и степень генетических вариаций, которые доступны и вносятся с помощью биотехнологических инструментов. Методы сохранения in vitro с использованием синтетических семян, медленного роста и криоконсервации станут неотъемлемой и важной частью общей стратегии сохранения в управлении генетическими ресурсами гермоплазмы ванили. Кроме того, технология синтетических семян представляет собой идеальное средство для обмена незараженным посадочным материалом.
Глава 6. Системы выращивания
Введение
Ваниль (Vanilla planifolia) – это редкое многолетнее полуэпифитное суккулентное растение, которое использует лесные деревья в своей естественной среде обитания для поддержки, тени и создания естественного перегноя. Леса, где встречается дикорастущая V. planifolia, классифицируются как selva alta perennifolia (высокие вечнозеленые тропические леса) – самые влажные из тропических лесов. Сегодня V. planifolia культивируется в различных производственных системах, которые в некоторой степени имитируют агроэкологические параметры, характерные для естественной среды обитания этого вида. Технологии выращивания и методы ухода за ванилью улучшались производителями ванили во всем мире, в основном, благодаря методам проб и ошибок. Напротив, эмпирические агрономические исследования ванили практически отсутствуют.
В этой главе подробно описаны агроэкологические требования, системы производства, размножения, выращивания/управления, цветения/опыления и сбора V. planifolia. Эта информация основана в основном на наблюдениях, экспериментах, а также на опубликованных статьях и руководствах по выращиванию, написанных людьми, имеющими личный опыт выращивания ванили.
Агроэкологические условия
Для достижения оптимальных условий роста и продуктивности, при выращивании ванили требуется соблюдение следующих агроэкологических параметров.
Климат
V. planifolia хорошо растет в жарком и влажном тропическом климате.
Температура
V. planifolia лучше всего растет при температуре от 20°C до 30°C (Childers and Cibes, 1948; Ranadive, 2005) и может переносить высокую температуру до 32°C (Purseglove et al., 1981; Anandaraj et al., 2005). Температура ниже 20°C подавляет рост и интенсивность цветения растений (Ranadive, 2005); температура выше 32°C вызывает пожелтение вегетативных частей и преждевременное опадение плодов (Anandaraj et al., 2005; Hernández Hernández, 2007b).