Отец начал подготавливать бумаги для оформления свидетельства на изобретение. К слову сказать, начальство одобрило его инициативу и намекнуло, что и их фамилии, смотрелись бы в списке авторов очень даже неплохо. Отец безропотно согласился, ведь именно так у них с Сашей и было задумано. Параллельно, он тайком ото всех, изготавливал детали для сборки первого пипеточного дозатора.
Наконец, день икс настал и юный изобретатель пригласил отца в надомную лабораторию, для наглядной демонстрации своего изобретения. На столе стояли три пробирки с номерами: один, два и три, в которых было по десять миллилитров какой-то жидкости. Рядом стояли три таких же, но без номеров… но в которых тоже было по десять миллилитров жидкости.
— Батя, — сказал сын, в этих пробирках с номерами, находятся разведенные сыворотки. Человеческая — пробирка номер один, кролика — пробирка номер два, и собаки — пробирка номер три. В концентрации десять микрограмм на один миллилитр. Это в тысячу раз меньше, чем их концентрация в цельной крови.
— Понял.
— Ты возьмешь эти стеклянные микропипетки и отберешь, каждой отдельной пипеткой, по десять микролитров из этих пробирок и перенесешь вот в эти. Мы получим разведенную концентрацию белка еще в тысячу раз. То есть там будет по десять нанограмм на один миллилитр. Пометь пробирки так, чтобы первые номера не совпадали со вторыми. Чтобы я не знал в какой из пробирок второго ряда, находится каждая сыворотка. Для чистоты эксперимента. Когда закончишь, позови меня, — и сын вышел из кухни.
Через десять минут его позвал отец.
— Я все сделал!
— Хорошо! Сейчас я проведу опыт и скажу тебе, в какой пробирке второго ряда находится человеческая сыворотка.
— Саша! Тут же нанограммы! Это только радиоимунный метод может выявить, на современном этапе развития науки.
— Давай попробуем и мы! — с этими словами Саша открыл пенициллиновый флакон и, извлекая из него по круглому диску диаметром пять миллиметров, бросил их по одному в три пробирки. Затем, добавил в каждую пробирку по миллилитру разведенной сыворотки из второго ряда пробирок. Пометив пробирки, он поставил их на качающуюся платформу.
— Подождем тридцать минут, — заявил сын. Когда полчаса прошли, он с помощью водоструйного насоса удалил жидкость из пробирок и налил специальный моющий раствор и снова удалил его, повторив операцию три раза.
Затем, он открыл другую пробирку и налил из нее, в каждую пробирку с дисками, по одному миллилитру жидкости.
— Подождем еще полчаса, — снова сказал он. Когда время истекло, он опять три раза промыл диски, а затем добавил в каждую пробирку по одному миллилитру нового раствора из флакона темного стекла. После чего, накрыл пробирки коробкой.
— Нужна темнота. Подождем еще полчаса.
Время, будто застыло. Но и эти полчаса наконец истекли. Открыв коробку, они увидели, что две пробирки были с таким же прозрачным раствором. А вот в третей пробирке, раствор окрасился в ярко желтый цвет.
— Человеческая сыворотка находилась в пробирке номер три! Правильно? — спросил сын отца. Тот потрясенно, не в силах вымолвить ни слова, смотрел на пробирки.
— Правильно! Но… как ты это сделал? — лицо мужчины исказилось недоумением.
— Папа! Старые методы, были основаны на визуализации результатов реакции только антигенов и антител, когда невидимые глазом молекулы, склеиваясь между собой, превращаются в видимые для глаза преципитаты. Но для этого их должно быть очень много. А когда их мало, то их и не видно. Во-первых, это требует много времени, не меньше суток, а во-вторых, чувствительность таких реакций невысока. Как правило, миллиграммы, и очень редко микрограммы.
— Это я знаю! А ты что сделал?
— Я прикрепил фермент к антителам против белков человеческой сыворотки.
— И что?
— А то! Что одна молекула антигена и одна молекула антитела, образуют комплекс, который можно обнаружить только при помощи электронного микроскопа. Я прикрепил к антителу, а можно и к антигену, молекулу фермента. И одна молекула этого фермента может расщепить тысячи молекул субстрата. Ты понимаешь, что обнаружить тысячу расщеплённых молекул субстрата, гораздо легче, чем одну пару молекул антиген-антитело!
— Поясни! — попросил озадаченный отец.
— Вот тебе конкретный пример. Я прикрепил молекулу фермента пероксидазы хрена, к антителу. Потом добавил раствор субстрата и хромогена. Хромоген — это вещество, которое меняет свой цвет при разрушении ферментом субстрата. В качестве субстрата, я использовал обыкновенную перекись водорода. Пероксидаза разрушает перекись водорода до простой воды, и атомарного кислорода. И что очень важно, пероксидаза переносит этот кислород на молекулу хромогена, — это оротофенилендиамин, окисляя его. И если в не окислившейся форме он представляет собой прозрачный раствор, то в окисленной, он приобретает ярко желтый цвет! И делает эту реакцию антиген-антитело видимой невооружённым глазом!