Технология получения мицелия
Маточную культуру (мицелий) получают в результанте посева спор, выделения из части плодового тела и в результате селекционной работы. В качестве питательных сред для культивирования высших базидиомицетов рекомендуются следующие:
– сусло-агар: для его приготовления берут 1 литр пивного сусла 7-8 град. по Баллингу, добавляют 20 г агар-агара и варят до полного его растворения. Сусло-агар в горячем виде разливают по пробиркам (примерно 1/3 объема), закрывают ватно-марлевыми пробками и стерилизуют в течение получаса при давлении 1,5 атмосферы и температуре 101 град. С. После стерилизации пробирки устанавливают на столе в сильно наклонном положении, так, чтобы среда не доходила до пробки на 3– 4 см и при застывании имела большую поверхность;
– овсяной агар: овсяная мука — 30 г , вода — 970 мл, агар — 15 г . Овсяная мука кипятится в воде 1 час при помешивании, затем фильтруется через фильтр Гаузе;
– морковный агар: экстракт моркови — 400 мл, вода — 600 мл, агар — 15 г , рН=6,0. Раздробленная морковь смешивается с водой в отношении 2:5, отваривается в течение 30 минут, фильтруется.
Кроме приведенных примеров питательных сред имеется ряд других. Наиболее часто употребляемой является сусло-агар.
После того как среда застыла, в пробирку в стерильных условиях вносят маточную культуру, споры или часть плодового тела гриба.
Рис. 1. Этапы выращивания посевного мицелия:
1 — кусочек плодового тела гриба; 2 — пробирка с чистой культурой; 3 — чашка Петри с культурой гриба; 4 — молочная бутылка с зерновым мицелием; 5 — трехлитровая банка с мицелием; 6 — готовый посевной мицелий в полиэтиленовом пакете
Эту операцию проводят при помощи инокуляционной петли, которую можно изготовить из обыкновенной вязальной спицы или стальной проволоки, загнув на 100 мм ее конец и сточив его на нет. Во избежание попадания посторонних микроорганизмов инокуляционную петлю перед применением прокаливают над открытым огнем. Затем, если для получения культуры используют часть плодового тела, гриб аккуратно разламывают на две половинки и из верхней части ножки при помощи инокуляционной петли вырезают кусочек ткани гриба. Для обеспечения стерильности его окунают в перекись водорода, а затем над пламенем горелки открывают пробирку с питательной средой и помещают на нее кусочек ткани гриба. Петлю вынимают, пробирку закрывают предварительно обожженной над огнем пробкой. Во время этой операции нельзя класть пробку на стол, ее придерживают мизинцем правой руки (рис. 2).
Рис. 2. Последовательность операций при внесении кусочка плодового тела гриба на стерильную питательную среду
Пробирки на период зарастания кладут в термостат или затемненное помещение с температурой воздуха 24 град. С. Через пару недель грибница полностью освоит питательную среду, и ее можно будет использовать для дальнейшего размножения. Маточные культуры хранят при температуре 1—2 град. С, ежегодно пересевая на свежую питательную среду. При длительном хранении и частых пересевах маточных культур проводят микробиологический контроль.
При выращивании шампиньона в качестве посевного материала используют компостный и зерновой мицелий. Для приготовления компостного мицелия берут готовый шампиньонный компост, приготовленный по вышеописанной технологии, и помещают его в трехлитровые банки. Банки заполняют на 2/3 объема, субстрат уплотняют, в центре компоста делают отверстие диаметром 2,5– 3 см . После этого банку закатывают металлической крышкой, имеющей отверстие диаметром 2,5– 3 см . Отверстие затыкают ватно-марлевой пробкой. Банки с компостом стерилизуют в автоклавах в течение 1,5-2 часов при давлении 2 атмосферы. После остывания субстрата до 24 град. С в специальном стерильном помещении (бокс, инокуляционная) в банку вносят чистую культуру гриба, выращенного на питательной среде или на зерне.
В каждую банку через отверстие в крышке вносят 25– 35 г зернового мицелия или содержание одной пробирки с чистой культурой. Если инокуляцию проводят культурой, выращенной на агаровой среде, то для того, чтобы отслоить содержание пробирки от ее стенок, пробирку и инокуляционную петлю некоторое время держат над пламенем горелки. Затем над пламенем открывают пробирку, вводят в нее инокуляционную петлю и отслаивают среду с чистой культурой от стекла. После этого быстро вынимают пробку из крышки банки и с помощью инокуляционной петли вносят содержимое пробирки в банку. Отверстие в крышке банки сразу закрывают (рис. 3).
Рис. 3. Внесение чистой культуры на стерильный субстрат при получении компостного мицелия
Более подробно мы остановимся на подготовке зерна. Для получения зернового мицелия к 10 кг зерна добавляют 15 литров воды и варят, в зависимости от твердости зерна, в течение 0,5-1 часа на слабом огне. Готовое зерно должно быть не разваренным, но мягким. Для производства мицелия шампиньонов варить зерно придется несколько дольше, чем для приготовления мицелия вешенки. Затем воду сливают, а зерно помещают на чистую поверхность слоем 2– 3 см для подсыхания. Иногда для ускорения процесса поверхностного подсыхания зерна используют приспособление, показанное на рис. 4, состоящее из деревянного короба 1 с вмонтированным в него обычным комнатным вентилятором. Сверху короб накрывается мелкоячеистыми сетками 3, на которые насыпают зерно 4. К зерну добавляют 120 г гипса и 30 г мела.
Рис. 4. Приспособление для ускоренной сушки зерна
При помощи этой операции регулируется кислотность субстрата и улучшается его структура. Затем зерном заполняют литровые молочные бутылки, одно-, двух-, трехлитровые банки или полипропиленовые пакеты. Емкости закрывают ватно-марлевыми пробками и помещают в автоклав.
Автоклавирование проводят в течение 1-1,5 часа при давлении 2 атмосферы. После того как субстрат остынет, емкости переносят в инокуляционную, включают бактерицидную лампу и оставляют на час. Через 15 минут после выключения бактерицидной лампы в емкости со стерильным зерном вносят мицелий, таким же образом, как и при производстве компостного мицелия, описанного выше.
После инокуляции емкости ставят в термостаты с температурой 24 град. С, до полного освоения субстрата мицелием. Качественный зерновой мицелий может быть использован для засева новых емкостей с зерном, в зависимости от вида гриба таких пересевов может быть 5-7, после чего нужно снова использовать свежую маточную культуру.
Готовый зерновой мицелий (если при его производстве использовалась стеклянная тара) расфасовывают в полиэтиленовые пакеты и реализуют, а стеклянные емкости используют для дальнейшего производства грибницы. Полипропиленовые пакеты используют однократно, при их применении отпадает необходимость в фасовке и уменьшается вероятность попадания на зерно посторонних микроорганизмов.
Зерновой мицелий можно хранить при температуре 0+2 град. С 3-4 месяца, а компостный — около года.
Во время культивирования емкости с развивающейся грибницей нужно периодически просматривать. При обнаружении на зерне пятен зеленого, бурого или оранжевого цвета (грибных загрязнителей) или потемневших слизистых зерен и жидкости с характерным запахом (бактериальное заражение) такие емкости немедленно удаляют из термостатировочного помещения и стерилизуют в специально отведенном для этих целей автоклаве при давлении 2-2,5 атмосферы в течение двух часов.
Скорость роста у мицелия разных видов грибов неодинакова. Так, мицелий вешенки способен освоить объем зерна, размещенного в литровой молочной бутылке, за неделю, а кольцевику и шампиньону для этого понадобится в три раза больше времени. Эти особенности необходимо учитывать при производстве мицелия.